中药复方成分复杂、作用靶点多样，明确其关键作用靶点是揭示多成分协同机制、阐释药效物质基础的重要环节。通过靶点鉴定技术，可突破传统候选靶点假设限制，系统挖掘复方中活性成分与靶蛋白的作用关系，为中药现代化研究提供机制依据。

|  复方靶点鉴定方法一：isoTOP-ABPP

isoTOP-ABPP技术基于可结合活性半胱氨酸的DBIA探针，在活细胞中加入中药复方或活性分子与之竞争半胱氨酸结合位点，从而实现药物的靶点筛选鉴定。

研究案例：

中国中医科学院中药研究所研究团队采用isoTOP-ABPP技术筛选蒲地蓝的结合靶点。在炎症诱导的巨噬细胞模型中，共鉴定出了77个高置信度靶点蛋白。其中，甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）因其在蒲地蓝竞争后显著富集。通过下拉实验、CETSA+WB实验和免疫荧光共定位分析共同证实了蒲地蓝与GAPDH的直接相互作用。进一步通过成分鉴定和功能实验证实了其中显著缓解肺损伤的活性成分。

|  复方靶点鉴定方法二：DARTS+MS

DARTS技术传统用于小分子靶蛋白的鉴定，无需进行样本的结构修饰，可在细胞或组织裂解物种筛选靶点，所以对于中药复方这类复杂样本的靶点筛选尤为有效。

研究案例：

海军军医大学研究团队利用DARTS技术对传统应用于心血管疾病的经典方剂四逆汤（SNT）进行了靶点筛选。通过质谱数据分析，研究者锁定了11个关键靶蛋白。结合前序实验结果与PPI蛋白互作网络分析，蛋白质二硫键异构酶家族的重要成员PDIA3可能是四逆汤保护心肌细胞凋亡的关键靶点蛋白。功能性实验证实，四逆汤在心肌损伤模型中能够显著调控PDIA3及相关靶点。

|  参考文献

1. Li X, Qin L, Sun Y, et al. Qingyu Yangjing formula ameliorates cyclophosphamide-induced oligoasthenospermia by regulating the hypothalamic-pituitary-gonadal axis and inhibiting testicular oxidative stress and apoptosis in rats. J Ethnopharmacol. 2026;356:120842. doi:10.1016/j.jep.2025.120842

2. Zhang D, Zhang J, Chen S, et al. An integrated approach for studying exposure, metabolism, and disposition of traditional Chinese medicine using PATBS and MDRB tools: a case study of semen Armeniacae Amarum. Chin Med. 2024;19 (1):158. Published 2024 Nov 14. doi:10.1186/s13020-024-01031-8

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