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  • 相比于传统的化学标记型寻靶技术,DARTS技术具有哪些显著的学术优势?

    传统标记法通常需要对药物小分子进行繁琐的化学结构改造以引入生物素或炔基基团,然而很多小分子没有合适的位点进行修饰,部分小分子可能因修饰导致空间位阻干扰其与蛋白结合口袋的适配性,进而引发假阴性结果。而DARTS由于直接基于原型药物进行筛选,彻底避免了探针修饰带来的活性干扰。其次,该技术属于全蛋白分析范畴,能直接检测细胞或组织提取液中的天然蛋白质,这极大还原了药物在体内的生理孵育环境,使筛选结果更具生物学意义。此外,该方法具有极强的样品普适性,适用于细胞、组织、菌种、甚至中药复方等复杂药物体系。


  • 复方的水煎液做DARTS的话,是需要有成分鉴定和定量分析吗?水煎液怎么处理和细胞孵育?

    ①不需要成分鉴定和定量分析结果;

    ②我们有相关的复方做DARTs的实验示例,也有相关的混合物做DARTs的文献参考。我们参考文献选用的混合物,客户前期使用混合物做细胞实验,找到混合物在癌细胞中的IC50,设置一系列梯度,将IC50包括在内,进行的筛靶。我们的DARTS是药物直接与细胞裂解液进行孵育,无活细胞孵育。需要注意的一点是,复方不同浓度孵育蛋白裂解液,所得到的上调蛋白不一致,客户需确认好有效浓度。


  • 为什么在DARTS实验的SDS-PAGE电:考染图上,往往看不到给药组与对照组之间有明显的差异条带?

    在进行DARTS预实验或正式跑胶后,许多实验人员会因为在凝胶成像图上未能观察到清晰的给药组和对照组差异条带而感到焦虑,但这在学术界和实际项目经验中是一种极为普遍的正常现象。由于细胞或组织裂解液是一个包含上万种天然蛋白的极其复杂的生物大分子体系,在同一个分子量段(即胶图上的同一位置)往往密集堆叠着数个甚至数十个不同的蛋白质;当小分子药物结合并特异性稳定其中某一个靶蛋白使其不被降解时,该靶蛋白在凝胶上保留的微弱灰度变化极易被同分子量区域其他大量非特异性降解或未降解蛋白的背景信号所彻底掩盖。因此,在大部分已发表的高水平文献和成熟的商业技术服务流程中,研究人员在跑完压缩胶后,都不会采用“针对某条特异差异条带切胶”的落后方式,而是直接采用整胶切块、整胶消化并直接上机打质谱(MS)的无偏向分析方案,这样能最大化地捕获裂解液中所有被微弱保护或敏感降解的蛋白质信号,获得更为全面和置信度极高的靶点数据集。